产品目录

本制品是一种经过改良的以溴酚蓝为染料的蛋白上样缓冲液。可以直接用于细胞或组织样品的裂解，并用于后续常规的SDS-PAGE蛋白样品的上样。使用1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液直接裂解蛋白样品的优点是比较便捷；缺点是裂解好的蛋白样品不能用常规的Bradford法或BCA法测定蛋白浓度。这样蛋白上样量的均一性就较难控制，需要借助考马斯亮蓝等的染色结果或Western的检测结果，来调整上样量。当细胞量或组织用量能控制得比较均一时，使用本裂解液直接裂解获取蛋白样品会比较便捷。本制品也可以用于SDS-PAGE时待上样蛋白样品的稀释等。

• 1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液中含少量DTT，有轻微刺激性气味，但不含剧毒的巯基乙醇。
  
• 1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液必须完全溶解后再使用。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 在室温或不超过37℃的水浴中溶解1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。
  
• 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150～250μL 1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液和细胞充分接触。通常1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液接触细胞1～2秒后，细胞就会被裂解。裂解后的样品收集到一洁净离心管内。
  
• 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150～250μL 1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液的比例加入1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50～100万细胞/管，然后再进行裂解。
  
• 对于组织样品：
  
  • 把组织剪切成细小的碎片。
    
  • 按照每20mg组织加入150～250μL 1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液的比例加入1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液的用量。)
    
  • 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
    
  • 充分裂解后，将样品收集到一洁净离心管内。
    说明：如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
• 100℃或沸水浴加热5～10分钟，以充分变性蛋白。
  说明：煮沸前通常会发现蛋白样品内有粘稠的半透明状物体，通常在本上样缓冲液内沸水浴煮沸8～10分钟后可以确保该粘稠的半透明状物体消失，以便于后续的上样操作。
  注意：如果起始时细胞或组织的用量较大，基因组DNA含量较高，煮沸5～10分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体。此时需要再煮沸5～10分钟或者加入适量1×的蛋白上样缓冲液后再煮沸3～5分钟。充分煮沸后一方面可以使结合在基因组DNA上的蛋白充分释放，同时会导致基因组DNA的部分断裂从而使粘稠感消失，这样就不会影响后续的上样操作了。
  
• 冷却到室温后，室温稍离心一下以沉淀可能出现的杂质等，上清即可直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。